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微透析 (Microdialysis)技術(shù)是一種將灌流取樣和透析技術(shù)結(jié)合起來并逐漸完善的一種從生物活體內(nèi)進行動態(tài)微量生化取樣的新技術(shù)。
01
什么是回收率?
某一特定物質(zhì)的回收率定義為透析液中的濃度與組織液中濃度的百分比。當流速接近零時,相對回收率將接近 100%,并隨著流速的增加而降低,它通常以百分比表示。絕對回收率定義為在規(guī)定的時間段內(nèi)回收的物質(zhì)的質(zhì)量。當流速為零時,它也為零,在較高流速時將達到最大值。
02
哪些因素會影響回收率?
物質(zhì)從組織中的絕對回收率(mol/時間單位)取決于(1)透析膜的“截留”(通常定義為 80% 的分子無法通過膜的道爾頓分子量),(2)膜的長度和直徑,(3)灌注液的流速 (4)化合物通過細胞外液的擴散系數(shù)。(5)其他因素,如培養(yǎng)基的pH值、物質(zhì)的降解也可能影響回收率。對于從探針進入組織的物質(zhì)來說,情況正好相反。
03
膜長度和流速如何影響回收率?
膜越長,流速越低,回收率越高
04
灌注液應該如何配制?
理想情況下,灌注液應盡可能接近細胞外液的成分。不過可通過改變鈉、鉀或鈣的濃度,來改變所研究部位膜的功能。CMA 產(chǎn)品有外周組織灌流液 T1和中樞神經(jīng)系統(tǒng)腦組織灌流液。
05
中樞神經(jīng)系統(tǒng)灌注液的pH值是多少?
為了與腦組織液具有相同的pH 值,中樞神經(jīng)系統(tǒng)灌流液是非緩沖溶液。故其 pH 值在 5-8 之間。
06
中樞神經(jīng)系統(tǒng)灌注液的pH值如何影響組織?
由于中樞神經(jīng)系統(tǒng)灌流液無緩沖作用,所以它不會影響組織的pH。灌流液的pH值與周圍組織的pH值相同。但是,膜對組織中的緩沖物質(zhì)的回收率不同,會對組織的pH 產(chǎn)生較小的影響。
07
灌流液的流速設定為多少?
如果要在單位時間內(nèi)去除或引入盡可能多的分子,應使用高流速。若想獲得高濃度的透析液(高回收率),應使用低流速。但需要注意的是低流速收集的透析液體積較小,因此在設定流速時還要考慮分析樣本所需用的體積。
08
獲得穩(wěn)態(tài)平衡需要多長時間?
將探針植入組織總是會造成一定的傷害,細胞功能也不會立即恢復。通常灌流一個小時可達到“基線條件”。
09
分子通過膜的能力隨著分子量的增加呈對數(shù)遞減。根據(jù)經(jīng)驗可得知,當使用截留量20,000 Da的膜時,大多數(shù)分子量高達5,000 Da的物質(zhì)都可以進行透析。這種情況完全依賴于分析方法的實準確性和靈敏度。
10
什么原因?qū)е铝魉馘e誤?
可能是未將正在使用的注射器校準泵。注射器可能泄漏,或者沒有使用 CMA 配套的注射器。
11
什么原因?qū)е挛⑼肝鰳悠敷w積不足?
探針漏液,管路被堵塞,泵可能出了問題,或者管路接頭漏液。
12
為什么回收率與相對回收率如此之低?
回收率的濃度永遠不會與您在培養(yǎng)基中看到的相似。除非您的介質(zhì)和灌注液之間完全平衡,否則透析液中給定物質(zhì)的濃度將低于其在溶液中的實際濃度。這同樣適用于體內(nèi)和原位實驗。
透析液與組織(或溶液)濃度之間的關系稱為“相對回收率”,定義為透析液/間質(zhì)濃度比值,以百分比表示:
相對回收率= Cmd/Cint=1-exp-K0 A/F
其中 Cmd 和 Cint 分別是微透析液和間質(zhì)(組織或溶液)中分析物的濃度,K0 是平均傳質(zhì),A 是膜表面,F(xiàn) 是透析液流速。
綜上所述,增加膜表面或降低流速會得到更高的相對回收率以及膜孔徑大小。然而,由于微透析膜上沒有完全的平衡,透析液中被測物質(zhì)的濃度永遠不會等于真正的間質(zhì)濃度。
如果您需要知道間質(zhì)濃度,可以使用其他方法進行計算,例如無凈通量法。
雙通道微透析取樣系統(tǒng)
四通道微透析取樣系統(tǒng)
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